皖仪科技液相色谱检测食品中的6种着色剂
摘要：本文参考GB 5009.35-2016标准建立了一种高效液相色谱法测定食品中6种着色剂（柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝和赤藓红）含量的分析方法。结果表明1.00-50.0μg/mL浓度范围内的线性决定系数R平方值均大于0.999，具有良好线性，符合实验要求。6种着色剂峰分离度均大于3，分离度良好。6种着色剂的保留时间重复性小于0.1%，峰面积重复性小于0.2%，测试重复性良好。该方法准确可靠、灵敏度高，满足测试需求。
前言
着色剂又称食品色素，是以食品着色为主要目的，使食品赋予色泽和改善食品色泽的物质。长期食用着色剂超标的产品，将危害消费者的身体健康。食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
1 实验方法
1.1 仪器配置
表1 高效液相色谱系统配置清单
1.2 测试条件
色谱柱：C18 5μm, 4.6×250mm；
柱温：35℃；
波长：254nm；
流速：1.0 mL/min；
进样体积：10μL；
流动相：A/B=0.02mol/L乙酸铵溶液/甲醇；
洗脱方式：梯度洗脱。
表2 梯度条件
1.3 设备及试剂、耗材
试剂：柠檬黄(CAS:1934-21-0)；
日落黄(CAS:2783-94-0)；
亮蓝(CAS:3844-45-9)；
胭脂红(CAS:2611-82-7)；
苋菜红(CAS:915-67-3)；
赤藓红(CAS:16423-68-0)；
甲醇：色谱纯；
乙酸铵：分析纯；
设备：超声脱气装置；
耗材：滤膜：水相针式滤器（聚醚砜）0.45μm；
一次性无菌加液器：2mL 0.6*25mm1.
1.4 标样制备
1.4.1 着色剂混标配制
分别准确移取胭脂红，亮蓝，日落黄，苋菜红，赤藓红标准溶液各1.0mL，柠檬黄标准溶液0.5mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤。配制成质量浓度分别为胭脂红、亮蓝、日落黄、苋菜红标准溶液浓度为50.0μg/mL，25.0μg/mL的柠檬黄标准溶液，10.0μg/mL的赤藓红标准溶液。置于4℃冰箱中冷藏保存。
1.4.2 六种着色剂混标系列校准溶液
配制胭脂红10μg/mL,亮蓝50μg/mL，日落黄25μg/mL，苋菜红25μg/mL，赤藓红25μg/mL，柠檬黄5μg/mL不同浓度的混标溶液，加水定容至1ml。逐级稀释，配制成不同浓度梯度的6种着色剂混标使用液。
1.4.3 六种着色剂单标标准溶液配制
分别准确移取胭脂红，亮蓝，日落黄，苋菜红，赤藓红标准溶液各1.0mL，柠檬黄标准溶液0.5mL于6个10mL容量瓶中，分别用水定容至刻度，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤。配制成质量浓度分别为胭脂红、亮蓝、日落黄、苋菜红标准溶液浓度为50.0μg/mL，25.0μg/mL的柠檬黄标准溶液，10.0μg/mL的赤藓红标准溶液。置于4℃冰箱中冷藏保存。
2 结果与讨论
2.1 单标定性及系统适用性
取1.4.3中6种着色剂单标标准溶液和1.4.1中6种着色剂混标溶液，按照1.2的测试条件进样分析，通过单标定性确定混标中不同着色剂出峰时间，谱图如图1所示。通过混标谱图分析得到六个峰的分离度均大于3，分离度良好。
图1 单标定性分析谱图
2.2 标准曲线取
1.4.2中6种着色剂混标系列校准溶液，按照1.2的测试条件进样分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立工作曲线。6种着色剂标曲结果分别如图2-7所示。不同浓度曲线重叠谱图如图8所示。6种着色剂曲线的线性决定系数R平方值均大于0.999，具有良好线性关系，符合实验要求。
图2 柠檬黄系列校准曲线线性图
图3 苋菜红系列校准曲线线性图
图4 胭脂红系列校准曲线线性图
图5 日落黄系列校准曲线线性图
图6 亮蓝系列校准曲线线性图
图7 赤藓红系列校准曲线线性图
图8 六种着色剂校准系列溶液重叠谱图
2.3 重复性
取1.4.1中6种着色剂混标溶液重复进样6次，按照1.2的测试条件分别连续进样测定6次，重复性色谱图如图9所示，根据测试结果可得，6种着色剂的保留时间重复性小于0.1%，峰面积重复性小于0.2%，测试重复性良好说明皖仪科技LC3300系列高效液相色谱仪具有良好的精密度。
图9 六种着色剂混标重复性叠加谱图
3 结论
本文使用皖仪科技LC3300系列高效液相色谱仪对食品中的着色剂进行了检测，结果表明1.00-50.0μg/mL浓度范围内的线性决定系数R平方值均大于0.999，具有良好线性，符合实验要求。6种着色剂峰分离度均大于3，分离度良好。6种着色剂的保留时间重复性小于0.1%，峰面积重复性小于0.2%，测试重复性良好。该方法准确可靠、灵敏度高，满足测试需求。
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